豬葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟如下：
?樣本采集?
從待檢測(cè)樣本中采集血液、組織等樣本，置于無菌無酶容器中妥善保存，避免樣本污染降解。
?DNA提取?
使用柱式或磁珠法核酸提取試劑盒，從樣本中分離純化豬葡萄球菌的基因組DNA，提取完成后可暫存于-20℃環(huán)境。
?試劑準(zhǔn)備?
從-20℃冰箱取出試劑盒內(nèi)的PCR反應(yīng)液、陰陽對(duì)照等組分，充分融化混勻后瞬時(shí)離心，按反應(yīng)數(shù)配制體系，預(yù)留1管的誤差余量，將混合液按20μl/管分裝至PCR反應(yīng)管。
?加樣操作?
向各反應(yīng)管中分別加入5μl待測(cè)樣本DNA、試劑盒自帶的陰性對(duì)照品、陽性對(duì)照品，終體系為25μl，蓋緊管蓋后低速瞬時(shí)離心。
?PCR擴(kuò)增?
將反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，設(shè)置程序：37℃UNG處理2分鐘，95℃預(yù)變性3分鐘，之后執(zhí)行40個(gè)循環(huán)（95℃5秒、55℃40秒，此階段采集FAM通道熒光信號(hào)）。
?結(jié)果判定?
陽性對(duì)照CT值≤35、陰性對(duì)照CT值>38時(shí)，實(shí)驗(yàn)有效；樣本CT值≤35判定為陽性，CT值>38判定為陰性，35~38區(qū)間的樣本需重復(fù)復(fù)檢確認(rèn)。
操作需嚴(yán)格遵守基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室分區(qū)規(guī)范，各區(qū)域耗材專用避免交叉污染，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)工作臺(tái)和廢棄物進(jìn)行嚴(yán)格消毒滅菌。
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